青贮有机酸是将新鲜的植物收集起来并压实,和外界隔绝空气,在微生物如大肠杆菌、霉菌、酵母菌等作用下,进行厌氧发酵,产生了一系列的有机酸。青贮材料有玉米,高粱,草类,豆类等,所产生的有机酸包括甲酸,乙酸,丙酸,丁酸,乳酸,山梨酸,苯甲酸等。青贮有机酸能够降低环境的pH值,在一定程度上抑制了微生物的生长和繁殖。青贮一般是用做饲料的,通过检测青贮饲料中的有机酸含量,可以及时了解饲料的发酵程度和质量状况。有机酸含量过高或过低都可能影响饲料的营养价值和保存期限。

实验室检测青贮有机酸的含量,根据具体有机酸来确定方法。常用到的有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法等。以HPLC为例,用乳酸,乙酸,丙酸,丁酸为标准品,测定青贮中的有机酸含量。
前处理:称取青贮样品20g,放到一个容器中,加入180mL的水,用组织捣碎机匀浆1min。用4层的纱布粗过滤,在用滤纸过滤,浸提液用0.45um微孔滤膜过滤待测。

色谱条件:C18色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径,柱温20-25℃;以磷酸二氢钾(用磷酸调pH值)和甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为1ml/min,紫外检测器,波长为215nm,进样量10-20uL。也有用离子交换色谱柱,55℃,2.5mmol/L的硫酸溶液的流动相,流速0.6ml/min,紫外检测器,210nm,进样量10uL。

标准曲线:将4种标准品,进行溶解,梯度稀释6个浓度点,保持在检测器的有效检测范围内。按色谱条件,进样到HPLC,在软件中记录各个色谱峰。以色谱峰面积为纵坐标,对应有机酸的各个浓度点为横坐标,绘制出标准曲线,得到回归方程。r2>0.999,确保测试数据的有效性。在很多的文献中,需要对色谱条件进验证和优化,测定实验的重复性,精密度,加标回收率等。
样品测定:将样品注入到HPLC中,对应的色谱峰的出峰时间是一致的,得到相应的峰面积。根据标准曲线的回归方程,计算出样品中的各种有机酸的含量。

实验室检测青贮有机酸的含量,根据具体有机酸来确定方法。常用到的有高效液相色谱(HPLC)法、气相色谱(GC)法等。以HPLC为例,用乳酸,乙酸,丙酸,丁酸为标准品,测定青贮中的有机酸含量。
前处理:称取青贮样品20g,放到一个容器中,加入180mL的水,用组织捣碎机匀浆1min。用4层的纱布粗过滤,在用滤纸过滤,浸提液用0.45um微孔滤膜过滤待测。

色谱条件:C18色谱柱,250mm长,4.6mm内径,5um粒径,柱温20-25℃;以磷酸二氢钾(用磷酸调pH值)和甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为1ml/min,紫外检测器,波长为215nm,进样量10-20uL。也有用离子交换色谱柱,55℃,2.5mmol/L的硫酸溶液的流动相,流速0.6ml/min,紫外检测器,210nm,进样量10uL。

标准曲线:将4种标准品,进行溶解,梯度稀释6个浓度点,保持在检测器的有效检测范围内。按色谱条件,进样到HPLC,在软件中记录各个色谱峰。以色谱峰面积为纵坐标,对应有机酸的各个浓度点为横坐标,绘制出标准曲线,得到回归方程。r2>0.999,确保测试数据的有效性。在很多的文献中,需要对色谱条件进验证和优化,测定实验的重复性,精密度,加标回收率等。
样品测定:将样品注入到HPLC中,对应的色谱峰的出峰时间是一致的,得到相应的峰面积。根据标准曲线的回归方程,计算出样品中的各种有机酸的含量。